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曠場(open field test)分析系統(tǒng)是觀察研究實驗動物神經(jīng)精神變化、進入開闊環(huán)境后的各種行為,例如動物對新開闊環(huán)境的恐懼而主要在周邊區(qū)域活動,在中央?yún)^(qū)域活動較少,但動物的探究特性又促使其產(chǎn)生在中央?yún)^(qū)域活動的動機,也可觀察由此而產(chǎn)生的焦慮心理。中樞興奮藥物可以明顯增加自主的活動而減少探究行為,一定劑量的抗精神病藥物可以減少探究行為而不影響自主活動。
曠場實驗(open field test)又稱敞箱實驗,是評價實驗動物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。以實驗動物在新奇環(huán)境之中某些行為的發(fā)生頻率和持續(xù)時間等,反應實驗動物在陌生環(huán)境中的自主行為與探究行為,以尿便次數(shù)反應其緊張度。
使用VisuTrack動物行為學分析軟件,需要先設置好動物的識別區(qū)域,通過軟件自身強大的AI智能識別算法,可以自動識別動物的頭部、重心和尾巴,計算動物在曠場實驗箱中的活動路程、站立次數(shù)、跨格等級、區(qū)域偏好等行為。
曠場實驗操作簡單,在用于抑郁行為學評價中,無適期階段,操作步驟如下 :
(1) 實驗前,動物應適應檢測環(huán)境 30 ~ 60 min;
(2)實驗人員在VisuTrack軟件中預先設置好相應的參數(shù),記錄好動物的編號、日期、狀態(tài)信息;
(3) 動物放入測試箱后,即開始檢測,檢測時間宜為5~10 min;
(4) 每次實驗時應從同一位置同一方向?qū)游锓湃霚y試箱中央。
(1) 總路程(total distance):動物在實驗記錄時間內(nèi)產(chǎn)生的物理位移累積;
(2) 速度(speed):動物在單位時間產(chǎn)生的物理位移。 5min內(nèi)正常動物總路程多為1000~2500cm,速度為3~8cm/ s。 動物出現(xiàn)抑郁行為時,速度減少;
(3) 運動總時間(total move time):動物在實驗記錄時間內(nèi)的產(chǎn)生物理位 移時所需的時間累積。 正常動物運動時間多大于檢測時間的30%;抑郁行為判斷標準:與對照組相比有顯著性減低(P<0. 05);
(4) 站立次數(shù)(number of standing):動物在實驗記錄時間內(nèi)的站立總次數(shù)。10min檢測時間,正常大鼠站立次數(shù) 20 ~ 50 次。10min檢測時間,空白對照組小鼠站立次數(shù) 60~130次;抑郁行為判斷標準:與對照組相比顯著減低 (P < 0. 05)。
(5)糞便數(shù)量反應大鼠的焦慮情況。(VisuTrack軟件是目前市面上一款能夠自動檢測曠場實驗箱中糞便數(shù)量的動物行為學分析軟件)
1、實驗前需要對實驗動物每天撫摸1-2min以減少非特異性應激刺激對實驗動物檢測中的影響。
2、實驗過程中需要弱光照明,觀察者盡量與測試動物分隔。
3、實驗過程中需要環(huán)境安靜。
4、進行曠場檢測時,需要對實驗動物進行篩選,有些實驗動物在正常情況下水平方向或垂直方向的活動情況顯著低于同批動物平均水平,則需要將這些動物預先剔除。
5、實驗前需要提前至少3小時將動物帶入實驗室,降低動物對新環(huán)境的不安情緒。
6、實驗動物的性別、周齡盡量保持一致,因為激素水平可能會影響動物行為。
7、注意實驗動物的晝夜節(jié)律,在24h內(nèi)有其活動周期,盡量選擇同一時間段開展實驗。
8、OFT實驗對動物各方面影響較小,而其他行為學實驗(如強迫游泳、水迷宮、懸尾實驗)影響較大,因此同一批動物進行不同行為學測試時,應先進行OFT實驗。
9、實驗應在隔音,光強度和溫、濕度適宜且保持一致的行為實驗室內(nèi)進行。
10、兩次實驗之間清洗實驗設備,以免上次動物余留信息影響下次實驗結(jié)果。