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新物體識(shí)別測(cè)試是目前對(duì)小鼠zui常用的行為測(cè)試之一。在shou次測(cè)試中，給老鼠呈現(xiàn)兩個(gè)相似的物體，在第二次測(cè)試中，兩個(gè)物體中的一個(gè)會(huì)被一個(gè)新物體替換。探索新物體所花費(fèi)的時(shí)間為識(shí)別記憶提供了一個(gè)指標(biāo)。隨著越來越多的科學(xué)家使用這種方法，在新物體識(shí)別測(cè)試中使用的程序步驟可變性也穩(wěn)步增加。許多變量的原始測(cè)試已經(jīng)報(bào)道了物體 和區(qū)域特性，如動(dòng)物品種和性別、探索時(shí)間等項(xiàng)目，不幸的是，可能是新物體測(cè)試的特定偏好行為變量尚未被*檢驗(yàn)，或是記憶缺陷的問題，都可能是新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)失敗的原因。
設(shè)備
在大小、形狀(正方形、圓形或長(zhǎng)方形)和顏色方面，可利用的開闊區(qū)域存在很大的可變性。所有商業(yè)出售的曠場(chǎng)都是正方形或長(zhǎng)方形的，面積在27.3×27.3×20.3厘米(nolus或Med Associates)和40×40×40厘米(Cleversys)之間。據(jù)我們所知， 目前還沒有哪篇論文根據(jù)測(cè)試場(chǎng)地的形狀，即正方形或圓形，直接比較小鼠的物體識(shí)別性能。盡管如此，Kalueff等人26已經(jīng)證明，無論形狀如何，小鼠在空曠區(qū)域的行為(垂直、無支撐的垂直和標(biāo)準(zhǔn)活動(dòng)、梳理毛發(fā)、排便、小便和靠墻活動(dòng))都是相似的。這里我們選擇了一個(gè)透明的木箱(40×40×40厘米)。實(shí)驗(yàn)者應(yīng)觀察新物體在亮度、形狀、顏色、氣味、質(zhì)地等方面的特征。這兩個(gè)物體可能有相同的大小和氣味(幾乎沒有氣味的是罪li想的)。
由于嚙齒類動(dòng)物在辨別顏色方面存在困難，因此實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)關(guān)注物體的亮度和質(zhì)地。目標(biāo)是zui大化對(duì)象之間的差異，而不會(huì)無意中導(dǎo)致對(duì)其中一個(gè)對(duì)象的偏好。此外，在選擇對(duì)象時(shí)，實(shí)驗(yàn)者必須注意，要提供一個(gè)足夠的探索標(biāo)準(zhǔn)而不帶有習(xí)慣性、讓小鼠有可能爬過的物體。當(dāng)然，當(dāng)使用VisuTrack軟件視頻跟蹤時(shí)，研究人員就需要選擇無法攀爬的物體，因?yàn)閂isuTrack軟件（俯拍）很容易將攀爬視為探索。
最后，物體的重量必須保證老鼠無法移動(dòng)它們。如果沒有重物， 可以用雙面膠帶或其他粘合劑固定。在報(bào)道的實(shí)驗(yàn)中，我們使用了形狀和紋理不同的普通物體;這兩種物體都可以被老鼠爬上，而且在背景中都很顯眼，如樂高積木塔(8厘米,寬3.2厘米,白色,藍(lán)色,黃色,紅色和綠色磚塊)和裝滿沙子的塑料瓶(高9.5厘米,深2.5厘米,寬5.5厘米,與藍(lán)色的透明 塑料瓶蓋)。
測(cè)試的時(shí)間
探索行為受動(dòng)物狀態(tài)的影響，動(dòng)物狀態(tài)可能根據(jù)晝夜節(jié)律和光周期而變化。在實(shí)驗(yàn)中，小鼠被放置在一個(gè)光暗循環(huán)的周期中，測(cè)試一般在暗期(活動(dòng)期在08:00到20:00之間)。熟悉過程一般在上午進(jìn)行(從09:00開始)。因此，與焦慮相關(guān)的行為測(cè)試類似，測(cè)試的時(shí)間是至關(guān)重要的，在設(shè)置實(shí)驗(yàn)時(shí)必須考慮到，因?yàn)樗且粋€(gè)可以解釋達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)所需時(shí)間差異的因素。
在試驗(yàn)前的動(dòng)物處理
因?yàn)樵谖矬w識(shí)別測(cè)試中已經(jīng)證明先前的經(jīng)驗(yàn)可以改變嚙齒類動(dòng)物的行為反應(yīng)，動(dòng)物們一貫習(xí)慣于被實(shí)驗(yàn)者處理。重要的是要確保實(shí)驗(yàn)前的操作在動(dòng)物和處理組之間是一致的。理想情況下，在實(shí)驗(yàn)開始前，實(shí)驗(yàn)員應(yīng)每周兩次處理小鼠，每次1分鐘，至少持續(xù)1周，以避免新奇引起的應(yīng)激。同樣， 處理的時(shí)間持續(xù)時(shí)間和頻率必須根據(jù)使用的緊張程度和焦慮程度來調(diào)整。此外，小鼠應(yīng)至少在測(cè)試前30分鐘進(jìn)入測(cè)試室。
對(duì)物體的探索行為
評(píng)估探索行為的*的shou選方法仍然是一個(gè)爭(zhēng)論的問題，還沒有達(dá)成共識(shí)。在最初的論文中，對(duì)一個(gè)物體的探索被定義為:在距離小于或等于2厘米的地方“將鼻子指向" 這個(gè)物體?！叭欢灿袌?bào)道稱距離最小為4厘米。"大多數(shù)研究者同意的一點(diǎn)是，爬過或靠在一個(gè)物體上不被認(rèn)為是一種探索行為，除非這個(gè)行為伴隨著朝著物體的鼻子方向的行為。在這里，我們建議當(dāng)老鼠在看物體時(shí)嗅出物體或觸摸物體時(shí)(即當(dāng)鼻子和物體之間的距離小于2厘米時(shí))對(duì)物體探索進(jìn)行評(píng)分。爬上物體(除非老鼠嗅了嗅它爬上的物體)或咀嚼物體都不能算作探索。
數(shù)據(jù)收集
探索性行為由實(shí)驗(yàn)者或VisuTrack動(dòng)物行為錄像跟蹤系統(tǒng)評(píng)估。由于人工評(píng)分的一些低效率(耗時(shí)的因素，廣泛訓(xùn)練的必要性和 觀察者之間的可變性)，自動(dòng)系統(tǒng)已經(jīng)被用來跟蹤動(dòng)物行為。這種視頻跟蹤系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)記錄在物體周圍一個(gè)確定區(qū)域內(nèi)花費(fèi)的時(shí) 間。
只要采集參數(shù)不改變，這些系統(tǒng)將為所有不同組甚至不同研究中 的任何動(dòng)物提供可靠的結(jié)果。然而，軟件也可能在某些方面產(chǎn)生缺陷，必須加以考慮。例如，除了縮小對(duì)象的選擇范圍外， 獲得的結(jié)果與目標(biāo)區(qū)域的定義密切相關(guān)，因此可能在實(shí)驗(yàn)室之間存在差異。另一種潛在的可變性也可能出現(xiàn)在所選擇的攝像機(jī)的框架中或系統(tǒng)之間(與將要跟蹤的動(dòng)物身體部分有關(guān))。因此，當(dāng)任何動(dòng)物的身體部位在目標(biāo)區(qū)域時(shí)計(jì)算探索時(shí)間的系統(tǒng)將降低實(shí)驗(yàn)效率。換句話說，在該區(qū)域的探測(cè)時(shí)間將會(huì)增加，即使動(dòng)物只是爬到物體上或只是在該區(qū)域梳理而不是探索物體。
由于這些原因，在新物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn)中，需要準(zhǔn)確地評(píng)估動(dòng)物對(duì)物體的好奇程度，需要VisuTrack動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)詳細(xì)地跟蹤鼠類動(dòng)物的鼻尖、中心和尾根三個(gè)體位點(diǎn)來實(shí)現(xiàn)新物體識(shí)別試驗(yàn)。
自動(dòng)測(cè)量和分析大量的參數(shù)，如動(dòng)物探究物體所花的時(shí)間。 “頭朝向區(qū)域"指的是頭部進(jìn)入以新物體為中心的一定半徑范圍之內(nèi)的區(qū)域?？蒲腥藛T經(jīng)常使用這個(gè)參數(shù)來分析動(dòng)物探究物體的行為。 檢測(cè)和分析動(dòng)物的身體伸長(zhǎng)程度，并將其作為測(cè)定動(dòng)物好奇和探究行為的標(biāo)準(zhǔn)之一。 分析動(dòng)物在某區(qū)域的探究行為，如動(dòng)物鼻尖處于物體所在區(qū)域的總時(shí)間 選擇大小、形狀和顏色合適的曠場(chǎng)滿足研究需要在一個(gè)熟悉的環(huán)境里測(cè)試鼠類動(dòng)物對(duì)新物體的認(rèn)知能力是一種非常普遍的評(píng)估試驗(yàn)對(duì)象記憶能力的方法。
在新物體認(rèn)知能力試驗(yàn)中，測(cè)量和比較動(dòng)物對(duì)新物體和熟悉物體在興趣程度上的差別。如果動(dòng)物不分新舊物體，做出相同的探究反應(yīng)，我們可將其視為記憶缺失。 動(dòng)物對(duì)物體的探究在傳統(tǒng)意義上是這樣定義的：動(dòng)物頭部近距離靠近物體。為了測(cè)量這一參數(shù)，要了解動(dòng)物頭部所在的具體位置。動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)是識(shí)別鼠類動(dòng)物的鼻尖的理想工具。
